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提高轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率的注意事項(xiàng)

[2014/1/7]

  關(guān)于轉(zhuǎn)染體系的關(guān)鍵組分對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的效率有何影響,給予您一些關(guān)于如何使它們更有利于您研究方面的提示,DNA轉(zhuǎn)染如何提高轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)成功率。

  成功轉(zhuǎn)染第一步,細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)。有時(shí)需要根據(jù)細(xì)胞系來選擇合適的轉(zhuǎn)染方法;而有時(shí)一些啟動(dòng)子在不同的細(xì)胞系中表現(xiàn)的功能也不同。這些都是設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)需要考慮的因素,姑且不論。不過因?yàn)槭芟抻谔囟ǖ募?xì)胞,如何選擇合適的轉(zhuǎn)染方法就值得考究了。

  成功轉(zhuǎn)染第二步,質(zhì)粒的因素。啟動(dòng)子的選擇對(duì)于轉(zhuǎn)染基因的有效表達(dá)是非常重要的。對(duì)于轉(zhuǎn)染過程本身雖然無甚影響,但是對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果卻有著微妙的影響。

  RNA\siRNA\Oligo轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng):轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞匯合度常常會(huì)比DNA轉(zhuǎn)染高一點(diǎn),也許是因?yàn)镽NA轉(zhuǎn)染表達(dá)比DNA快?RNA轉(zhuǎn)染的用量必須參考轉(zhuǎn)染試劑說明,因?yàn)镽NA和轉(zhuǎn)染試劑的比例決定了轉(zhuǎn)染復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和凈電荷,以及是否容易被細(xì)胞膜吸附和內(nèi)吞。RNA少了固然表達(dá)不好,太多也會(huì)有毒性的問題。