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實(shí)驗(yàn)室儀器
按功能分
- 提供實(shí)驗(yàn)環(huán)境的設(shè)備
- 分離樣品并處理設(shè)備
- 對(duì)樣品前處理的設(shè)備
- 處理實(shí)驗(yàn)器材的設(shè)備
- 保存實(shí)驗(yàn)樣品用設(shè)備
- 1. 冰箱
- 2. 保鮮柜
- 3. 傳感器
- 4. 低壓電氣
- 5. 工業(yè)自動(dòng)化
- 6. 化學(xué)品儲(chǔ)存
- 7. 控濕柜
- 8. 冷藏柜
- 9. 冷凍箱
- 10. 循環(huán)烘箱
- 11. 液氮罐
- 12. 工業(yè)型液氮罐
- 13. 液氮容器配件
- 14. 油桶柜
- 15. 貯存箱
- 1. 搗碎機(jī)
- 2. 超聲波清洗器
- 3. 干燥箱
- 4. 滅菌器\消毒設(shè)備
- 5. 清洗機(jī)
- 1. 蛋類分析儀
- 2. 粉碎機(jī)
- 3. 谷物分析儀
- 4. 混勻儀
- 5. 攪拌器
- 6. 馬弗爐
- 7. 樣品制備設(shè)備
- 8. 破碎、研磨、均質(zhì)儀器
- 9. 消解
- 計(jì)量?jī)x器
- 培養(yǎng)孵育設(shè)備
- 基礎(chǔ)通用設(shè)備
- 通用分析儀器
- 樣品結(jié)果分析
- 1. 計(jì)數(shù)器
- 2. 衡器
- 3. 天平
- 1. CO2培養(yǎng)箱
- 2. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐
- 3. 封口用
- 4. 發(fā)芽箱
- 5. 孵育器
- 6. 發(fā)酵罐
- 7. 恒溫槽、低溫槽
- 8. 恒溫恒濕
- 9. 培養(yǎng)箱
- 10. 培養(yǎng)架
- 11. 人工氣候箱
- 12. 水浴、油浴、金屬浴
- 13. 搖床
- 14. 厭氧微需氧細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備
- 1. 邊臺(tái)
- 2. 刨冰機(jī)
- 3. 電熱板
- 4. 輻射檢測(cè)
- 5. 干燥箱
- 6. 瓶口分配器
- 7. 水質(zhì)分析類
- 8. 水質(zhì)采樣器
- 9. 實(shí)驗(yàn)臺(tái)
- 10. 溫、濕、氣壓、風(fēng)速、聲音、粉塵類
- 11. 穩(wěn)壓電源(UPS)
- 12. 文件柜
- 13. 移液器
- 14. 制造水、純水、超純水設(shè)備
- 15. 制冰機(jī)
- 16. 中央臺(tái)
- 17. 真空干燥箱
- 1. 比色計(jì)
- 2. 測(cè)厚儀
- 3. 光度計(jì)
- 4. 光譜儀
- 5. 光化學(xué)反應(yīng)儀
- 6. 電參數(shù)分析儀
- 7. 檢驗(yàn)分析類儀器
- 8. 瀝青檢測(cè)
- 9. 酶標(biāo)儀洗板機(jī)
- 10. 凝膠凈化系統(tǒng)
- 11. 氣質(zhì)聯(lián)用儀
- 12. 氣體發(fā)生裝置
- 13. 水份測(cè)定儀
- 14. 色譜類
- 15. 水質(zhì)分析、電化學(xué)儀
- 16. 石油、化工產(chǎn)品分析儀
- 17. 實(shí)驗(yàn)室管理軟件
- 18. 同位素檢測(cè)
- 19. 透視設(shè)備
- 20. 旋光儀
- 21. 濁度計(jì)
- 22. 折光儀
- 1. 阿貝折射儀
- 2. 比較側(cè)色儀
- 3. 粗纖維測(cè)定儀
- 4. 定氮儀
- 5. 滴點(diǎn)軟化點(diǎn)測(cè)定儀
- 6. 滴定儀
- 7. 氮磷鈣測(cè)定儀
- 8. 二氧化碳含量測(cè)定儀
- 9. 黃曲霉素測(cè)定儀
- 10. 均勻度測(cè)定儀
- 11. 流變儀
- 12. 粘度計(jì)
- 13. 熱量計(jì)( 量熱儀)
- 14. 熔點(diǎn)儀
- 15. 滲透壓儀
- 16. 水份測(cè)定儀
- 17. 應(yīng)力儀
- 18. 脂肪測(cè)定儀
- 顯微鏡
- 電化學(xué)分析類
- 其他
- 1. 電源
- 2. 光照組培架
- 3. 戶外檢測(cè)儀器
- 4. 戶外分析儀器
- 5. IVF工作站配套儀器
- 6. 空氣探測(cè)儀器
- 7. 科研氣象站
- 8. 空調(diào)
- 9. 冷卻器
- 10. 配件
- 11. 其他
- 12. 溶液
- 13. 軟件
- 14. 水質(zhì)分析、電化學(xué)儀
- 15. 實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)
- 16. 試劑
- 17. 現(xiàn)場(chǎng)儀表
- 1. 磁場(chǎng)強(qiáng)度
- 2. 電導(dǎo)率儀
- 3. 電極
- 4. 電化學(xué)工作站
- 5. 杜瓦瓶
- 6. 環(huán)保儀器
- 7. 離子測(cè)定儀
- 8. ORP
- 9. 溶解氧
- 10. 熱力學(xué)
- 11. 酸度計(jì)
- 12. TDS
- 13. 溫度測(cè)量
- 14. 物化實(shí)驗(yàn)配件
- 15. 壓力測(cè)量?jī)x表
- 16. 鹽度
- 17. 運(yùn)輸罐
按專業(yè)實(shí)驗(yàn)室分- 化學(xué)合成
- 乳品類檢測(cè)專用儀器
- 細(xì)胞工程類
- 種子檢測(cè)專用儀器
- 病理設(shè)備
- 1. 細(xì)胞分析儀
- 2. 細(xì)胞培養(yǎng)用品
- 3. 細(xì)胞融合、雜交
- 1. 種子檢測(cè)專用儀器
- 層析設(shè)備
- 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)備
- 糧油檢測(cè)
- 生物類基礎(chǔ)儀器
- 植物土壤檢測(cè)
- 1. 動(dòng)物呼吸機(jī)
- 2. 動(dòng)物固定器
- 3. 仿生消化系統(tǒng)
- 1. 電泳(電源)儀、電泳槽
- 2. 分子雜交
- 3. 基因工程
- 4. PCR儀
- 5. 紫外儀、凝膠成像系統(tǒng)
- 藥物檢測(cè)分析
- 地質(zhì)
- 紡織
- 分析儀器
- 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)
- 1. 臭氧濃度分析儀
- 2. 電化學(xué)分析
- 3. 煤質(zhì)分析儀系列
- 4. 石油儀器
- 5. 成分分析儀
- 6. 植物分析儀系統(tǒng)
- 水產(chǎn)品質(zhì)量安全
- 水產(chǎn)技術(shù)推廣
- 水生動(dòng)物防疫
- 食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室
- 疾病預(yù)防控制中心
- 1. 快速檢測(cè)試劑盒
- 2. 肉類檢測(cè)儀器
- 3. 食品安全快速分析儀
- 4. 食品安全檢測(cè)箱
- 5. 食品檢測(cè)儀器配套設(shè)備
- 6. 食品安全檢測(cè)儀器
- 7. 三十合一食品安全檢測(cè)儀
- 8. 相關(guān)配置、配件
- 供水、水文監(jiān)測(cè)
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環(huán)境監(jiān)測(cè)
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熒光RT-PCR技術(shù)可快速檢測(cè)H7N9禽流感病毒
[2013/4/24]
截至21日H7N9禽流感已確診102例,雖未有大面積爆發(fā),但快速檢測(cè)與診斷、確診疫情發(fā)生與否已成為防控工作的關(guān)鍵。4月17日,北京檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目“禽流感病毒H7N9亞型雙重?zé)晒釸T-PCR定型技術(shù)研究”鑒定會(huì)上,專家組一致同意項(xiàng)目成果通過(guò)鑒定,并建議在進(jìn)一步擴(kuò)大和完善動(dòng)物臨床驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,盡快推廣應(yīng)用。
目前,在國(guó)內(nèi)通用的確診禽類中禽流感病毒H7N9亞型的檢測(cè)技術(shù)中,除采用傳統(tǒng)的雞胚病毒分離方法外,通常采用核酸檢測(cè)方法,如普通PCR方法和基于熒光RT-PCR的“二步法”,但還沒(méi)有建立起采用熒光RT-PCR技術(shù)“一步法”檢測(cè)禽流感病毒H7N9亞型的方法。
據(jù)該項(xiàng)目組負(fù)責(zé)人、北京局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室博士高志強(qiáng)介紹,項(xiàng)目在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,共建立了3種檢測(cè)方法。最終的禽流感病毒H7N9亞型雙重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)方法是在禽流感病毒H7亞型和N9亞型單重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上通過(guò)優(yōu)化建立,從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)禽流感病毒H7N9亞型的一步快速定型。這種方法不僅能檢測(cè)最近流行的H7N9毒株,還可以用于篩查其他H7亞型毒株。此方法不僅引物特異,而且探針特異,這一“雙特異”性保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性,同時(shí)比普通PCR檢測(cè)技術(shù)要靈敏100~1000倍。
熒光RT-PCR檢測(cè)禽流感病毒原理
熒光RT-PCR就是在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)原有的一對(duì)特異性引物基礎(chǔ)上增加了一條特異性熒光雙標(biāo)記探針。標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位——北京出入境檢驗(yàn)檢疫局的科研人員根據(jù)A型流感病毒的核酸保守區(qū)共有序列,開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)上百對(duì)引物和幾十條探針序列,從中篩選出了敏感、特異的引物、探針,建立快速的通用型一步法檢測(cè)活禽或禽產(chǎn)品中所有A型禽流感病毒及針對(duì)H5、H7、H9亞型的熒光RT-PCR檢測(cè)技術(shù)。
PCR反應(yīng)進(jìn)行一個(gè)循環(huán),在合成了N條新鏈的同時(shí),就水解了N條探針,并釋放出了相應(yīng)數(shù)量的熒光基團(tuán)。儀器所接收到熒光信號(hào)的強(qiáng)度與PCR反應(yīng)產(chǎn)物的量呈對(duì)應(yīng)關(guān)系。隨著PCR反應(yīng)的循環(huán)往復(fù),PCR產(chǎn)物呈指數(shù)形式增長(zhǎng),熒光信號(hào)也相應(yīng)增長(zhǎng)。如果以每一個(gè)PCR循環(huán)結(jié)束時(shí)所測(cè)得的熒光值為縱坐標(biāo),以PCR循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)作圖,即可得到一條連接每一個(gè)循環(huán)后熒光值的擴(kuò)增曲線。當(dāng)檢測(cè)標(biāo)本中含有所要檢測(cè)病原體的核酸序列時(shí),所得到的曲線呈“S”型;而當(dāng)標(biāo)本中不含病原體,則PCR過(guò)程不發(fā)生,探針不被水解,不產(chǎn)生熒光信號(hào),其擴(kuò)增曲線為一水平線。也就是說(shuō),擴(kuò)增曲線為“S”型時(shí),就檢出了禽流感病毒;當(dāng)擴(kuò)增曲線為水平線時(shí),就沒(méi)有禽流感病毒檢出。利用熒光RT-PCR檢測(cè)方法的4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)有3項(xiàng)分別是對(duì)H5、H7、H9亞型禽流感病毒檢測(cè)提出的,還有一項(xiàng)是通用檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)。北京出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫實(shí)驗(yàn)室主任張鶴曉介紹說(shuō),該方法可以檢測(cè)H1~H15的各種禽流感病毒。
禽流感病毒各亞型均屬A型流感病毒,根據(jù)A型流感病毒共有基因特定的序列,合成一對(duì)特異性引物和一條特異性的熒光雙標(biāo)記探針。該探針與禽流感病毒特有的共同基因特異性結(jié)合,結(jié)合部位位于引物結(jié)合區(qū)域內(nèi)。探針的5’端和3’端分別標(biāo)記不同的熒光素,如5’端標(biāo)記FAM熒光素,它發(fā)出的熒光能夠被檢測(cè)儀器接收,稱為報(bào)告熒光基團(tuán)(用R表示),3’端一般標(biāo)記TAMRA熒光素,它在近距離內(nèi)能吸收5’端報(bào)告熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào),稱為淬滅熒光基團(tuán)(用Q表示)。
當(dāng)PCR反應(yīng)在退火階段時(shí),一對(duì)引物和一條探針同時(shí)與目的基因片段結(jié)合,此時(shí)探針上R基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被Q基團(tuán)所吸收,儀器檢測(cè)不到R所發(fā)出的熒光信號(hào);當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí),Taq酶在引物的引導(dǎo)下,以四種核苷酸為底物,根據(jù)堿基配對(duì)的原則,沿著模板鏈合成新鏈;當(dāng)鏈的延伸進(jìn)行到探針結(jié)合部位時(shí),受到探針的阻礙而無(wú)法繼續(xù),此時(shí)的Taq酶發(fā)揮它的5’→3’外切核酸酶的功能,將探針?biāo)獬蓡魏塑账,消除阻礙,與此同時(shí)標(biāo)記在探針上的R基團(tuán)游離出來(lái),R所發(fā)出的熒光再不為Q所吸收而被檢測(cè)儀所接收;在Taq酶的作用下繼續(xù)延伸過(guò)程合成完整的新鏈,R和Q基團(tuán)均游離于溶液中,儀器可繼續(xù)檢測(cè)到R所發(fā)出的熒光信號(hào)。
熒光RT-PCR檢測(cè)法特點(diǎn)
敏感性高、特異性強(qiáng):熒光RT-PCR檢測(cè)方法不僅能夠用來(lái)檢測(cè)禽流感病毒H5、H7、H9亞型,對(duì)其他禽流感病毒亞型也能檢出,而且用通用型探針、引物檢測(cè)常見(jiàn)的其他禽類病毒,未發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng),這就說(shuō)明該方法敏感性高、特異性強(qiáng)。
節(jié)約檢測(cè)時(shí)間:在檢驗(yàn)檢疫實(shí)踐中,如果用僅針對(duì)某一亞型禽流感病毒的探針、引物,一個(gè)亞型一個(gè)亞型的測(cè)試,勢(shì)必會(huì)浪費(fèi)人力、物力和時(shí)間。因此,先用通用型探針、引物驗(yàn)證是否是禽流感病毒,再用亞型的探針、引物分型,將大大節(jié)約檢測(cè)時(shí)間。
不易污染:熒光RT-PCR技術(shù)通過(guò)連接電腦分析PCR過(guò)程中產(chǎn)生的熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)、在線檢測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程,而無(wú)需對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行后處理,克服了傳統(tǒng)的PCR技術(shù)易污染的缺點(diǎn),可實(shí)現(xiàn)在同一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的操作程序條件下進(jìn)行穩(wěn)定、可靠的檢測(cè)。